5’RACE Kit

产品特点:

产品编号:PR6931 参考价格:10次 2800元
产品特点:优于TAKARA 3′-Full RACE Core Set Ver.2.0。对RNA结构进行分析时,一般先通过RT-PCR反应扩增目的区域,然后再对扩增出的目的DNA片段进行克隆、序列分析等。一般的RT-PCR反应很难得到全长的cDNA片段,而RACE法能有效地解决这一问题。高灵敏度、高特异性扩增cDNA 3’和5’末端全长的试剂盒。


5’RACE Kit


产品编号
包装
价格
PR6931
10次
2800元

产品说明:
本试剂盒是高灵敏度、高特异性扩增cDNA 5’末端全长的试剂盒。使用RT-PCR方法扩增目的DNA时,一般很难得到全长的cDNA片段,在基因工程研究中,分析遗传基因的全长cDNA序列十分重要。RACE法能有效解决这一问题。Bioteke 5’-Full RACE Kit能够通过已知的cDNA序列,高灵敏度、高特异性地扩增cDNA的5’末端的全长序列。本试剂盒通过RNA反转录酶与靶RNA的已知序列互补的引物引导合成第一链cDNA ,第一链cDNA的3’末端在通过末端转移酶使之同聚物加尾;这种合成的同聚物存在于mRNA 5’未知序列的上游并提供了一个引物结合位点,扩增反应的产物能克隆至T载体上。在进行试验时,应同时进行几个样品的反应时,应先配制各种试剂的混合液(Master Mix),然后再分装到每个反应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。用于cDNA合成的溶液试剂尽可能的DEPC进行处理,并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时,首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后,再将溶液进行过滤除菌处理。客户需自备试剂无水乙醇,基因特异性引物,PCR用相关试剂。

注意事项:
◆ 进行5′RACE实验时,为提高RACE结果的可信度,应同时M-MLV(-)的负对照实验。M-MLV(-)即:5′RACE Adaptor连接反应后进行RT反应时不添加M-MLV,如果M-MLV(-)的负对照实验没有特异性扩增,说明5′RACE结果来源于mRNA。
◆ 同时进行几个样品的反应时,应先配制各种试剂的混合液(Master Mix),然后再分装到每个反应管中。

问题解答:
1.Total RNA使用量是否可以增减?
可以。Total RNA使用2μg 时扩增效果较好,1μg时扩增稍弱。推荐RNA模板使用量为2μg 。
2. RT-PCR反应时何时需要将RNA预变性?
RNA立体结构比较复杂,RNA不预变性时没有得到理想结果时需要将RNA预变性。
3. 5′RACE扩增的电泳结果出现多种条带,为什么?
原因可能是:扩增的基因为多基因家族的成员; 已知序列信息有限,导致PCR扩增特异性差;mRNA 5′端剪切、拼接方式不同。



  • 5’RACE Kit

    文档类型:  Time:2019.02.26

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